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    酵母蛋白表达

    酵母蛋白表达

    强耀生物科技有限公司已成功构建完整的各种蛋白表达技术平台:包括原核蛋白表达与纯化、酵母蛋白表达与纯化、昆虫细胞蛋白表达与纯化、哺乳动物细胞蛋白表达与纯化。根据客户的需求,我们提供从基因合成,载体构建,基因表达,蛋白纯化、检测等一站式服务。为了保证蛋白纯化的质量,强耀生物建立了严格的产品质控体系及一整套完善的客户服务流程、保密制度以确保为客户提供优质的产品及成熟的服务。 我们的蛋白质团队在优化基因密码子、表达载体的设计和构建、融合对象和标签的选取、特定蛋白纯化系统的选择、蛋白生产工艺的优化等方面,拥有较多的经验??梢月憧突Ц鲂曰男枨?。

    酵母蛋白表达
    重组蛋白表达与纯化技术服务(P. Pichia表达系统)

    强耀生物科技有限公司目前成熟的表达体系包括:原核表达系统(大肠杆菌 E. coli表达系统)、酵母表达系统(P. Pichia)表达建立了严格的产品质控体系及一整套完善的客户服务流程、保密制度以确保为客户提供优质的产品及成熟的服务。 技术服务按步骤收费,您可以选择从以下任意一步开始提供服务或仅选择其中的单独一步,详细价格请垂询。

    ?酵母表达系统——步骤1. 目标基因亚克隆至酵母表达载体:
    扩增并抽提含有目标基因的载体质粒。
    将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上。
    测序验证构建质粒的准确性。
    可提供表达载体:pPICZα和pPIC9K
    提供客户:正确构建的重组表达质粒,含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。
    服务周期:1周
    ?酵母表达系统——步骤2. P. Pichia表达菌株电转化:
    酶切线性化表达质粒。
    将表达质粒通过电转化到高效的P. Pichia表达菌株中。
    利用蛋白酶去除不需要的纯化标签(Tag),再纯化获得所需的目标蛋白(可选,构建表达载体时需加入合适的蛋白酶切位点)。
    通过PCR鉴定至少挑选5个阳性克隆。
    可提供表达菌株:X33,GS115,KM71和SMD1168。
    提供客户:PCR阳性克隆及PCR结果报告。
    时间:1周
    ? 酵母表达系统——步骤3. P. Pichia表达菌株筛?。?/span>
    将5个阳性克隆于BMGY培养基中扩增,然后换至BMMY培养基中,并加入甲醇诱导表达目标蛋白。
    SDS-PAGE电泳检测培养上清中目标蛋白的表达情况,并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达。
    如果培养上清中检测不到表达,则通过将上清浓缩20倍作用再检测,或通过Western-blot方法检测目标蛋白表达(客户需要提供相关抗体)。
    提供客户:任意一个客户需要的阳性克隆菌株及表达筛选结果报告。
    时间:2周
    ?酵母表达系统——步骤4. P. Pichia表达菌株表达优化:
    挑选20个阳性克隆进行常规表达筛选,并对其中表达最好菌株优化表达条件。
    对挑选出来的单克隆菌株,优化培养及诱导条件(培养基,菌体密度,甲醇浓度,诱导时间等),提高目标蛋白的表达量。
    提供客户:任意三个客户需要的阳性克隆菌株及优化表达条件结果报告。
    时间:2周
    ?酵母表达系统——步骤5.目标蛋白表达及纯化:
    摇瓶培养1L重组酵母菌,诱导表达目标蛋白。
    通过亲和,离子交换,疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
    通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。
    通过Western-blot验证目标蛋白正确性。
    提供客户:纯化好的目标蛋白1~10mg及纯化报告??砂纯突б筇峁┖炕昵═ag)或切除纯化标签(Tag)的最终蛋白,纯度最高可达90%以上。
    时间:2~3周
    ?酵母表达系统——步骤6.目标蛋白的再加工及详细检测
    对生物学活性要求较高的纯化后蛋白产品进行复性研究。
    内毒素去除,除菌,冻干等进一步加工。
    通过HPLC,质谱等方法详细检测目标蛋白的质量。
    服务内容:
    1.复性研究:
    利用多达18种不同复性缓冲液的体系,对目标蛋白进行小量复性试验提供复性后样品供客户检测。
    可根据客户要求,按照其中一种样品的复性条件制备小量的复性蛋白。
    可提供具体的复性缓冲液配方及复性工艺。
    2.除内毒素
    3.过滤除菌
    4.冻干
    5.HPLC检测
    6.质谱检测
    提供客户:加工后的终产品及相关实验和检测报告。
    时间:1~2周
    ?酵母表达系统——步骤7. 大规模制备
    提供客户:合格的目标蛋白及服务报告。
    时间:协商
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